化妆品中含有多种营养成分，如蛋白质、油脂、水分等，这些成分在适宜的环境下容易滋生微生物，如细菌、霉菌等。微生物污染不仅会导致化妆品变质，还会产生有害物质，对消费者的皮肤造成损害。进行防腐测试是确保化妆品质量与安全的重要手段。

　　2024年7月8日，中国食品药品检定研究院发布《化妆品防腐剂挑战测试评估技术指南》（以下简称《技术指南》），在《技术指南》中推荐了化妆品防腐剂挑战测试所需的菌株、试剂、测试方法以及判定标准等信息供国内行业参考。

　　什么是防腐挑战

　　化妆品防腐效能评价试验常采用微生物挑战性试验，即“将一定量的微生物人工污染到化妆品中，模拟化妆品可能出现的污染情况，每隔一定时间检测其中的存活菌量，根据存活菌量的变化评价化妆品防腐体系效能的试验方法。”

　　化妆品防腐挑战试验步骤

　　1.菌液制备：

　　根据所需的测试菌种（如白色假丝酵母菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等），从保存好的试管斜面上或菌种保存管中取适量的菌体或菌种，接种于相应的培养基上，按照特定的温度和时间进行培养。

　　培养至指定代数后，用无菌缓冲液（如PBS缓冲液或无菌生理盐水）洗下菌苔，涡旋混匀后稀释至适当的浓度，制备成菌悬液备用。

　　2.样品准备与接种：

　　在挑战试验前，应先按照《化妆品安全技术规范》对样品进行“菌落总数”检测2。

　　取适量的菌悬液（如0.2mL），加入到装有样品（如20g或20mL）的无菌容器中，彻底混合均匀。

　　3.培养与计数：

　　接种后的样品置于特定的温度（如22.5℃±2.5℃）下培养，分别在指定的时间点（如7天、14天、28天）进行计数。

　　培养至特定时间后，取一定量的接种后样品，加入含有无菌中和剂的试管中，充分涡旋混匀后，进行菌落计数。

　　4.结果判定：

　　根据不同的评价标准（如美国药典USP、欧洲药典EP等），对培养后的样品进行结果判定。

　　判定标准通常包括细菌、酵母菌和霉菌的计数与初始计数量比较，以及在不同时间点之间的计数变化等。