消毒产品的持续消毒效果是衡量其实际应用价值的重要指标。WS/T10051-2026《消毒剂持续消毒效果实验室评价方法》的发布，为我国消毒剂长效性能评价建立了统一的技术规范。

　　一、标准技术框架概述

　　1.1评价思路的创新

　　传统消毒效果评价主要关注消毒剂作用特定时间后的即时杀菌率，无法反映产品在实际使用场景中的长效性能。WS/T10051-2026创新性地引入了"擦拭循环+多次接种"的试验模式，通过模拟物体表面在使用过程中受到的机械摩擦和反复污染，更真实地评估消毒剂的持续消毒能力。

　　这种评价思路的核心逻辑是：消毒剂涂布于物体表面后，在24小时内经历多次擦拭磨损和微生物污染，最终仍能保持足够的杀菌能力，才能认定为具有持续消毒作用。这一设计更加贴近实际使用场景，评价结果更具实用价值。

　　1.2技术路线概览

　　标准的整体技术路线可概括为"预处理—循环擦拭—最终评价"三个阶段：

　　预处理阶段：将消毒剂涂布于不锈钢载体表面，室温静置24小时自然晾干，模拟消毒剂使用后的初始状态。

　　循环擦拭阶段：通过干擦拭和湿擦拭交替进行，配合多次再接种，模拟24小时内物体表面受到的机械磨损和反复污染。标准规定完成两次完整擦拭循环，第三次湿擦拭后进入最终评价。

　　最终评价阶段：进行最终接种，作用10分钟后测定残留杀菌能力，以杀灭对数值作为评价指标。

　　这一技术路线既保证了试验的可操作性，又充分考虑了实际应用中的复杂因素。

　　二、试验菌株与载体选择要点

　　2.1指示菌的选择依据

　　标准规定基础试验菌株为金黄色葡萄球菌（ATCC6538）和大肠杆菌（8099），这一选择具有充分的科学依据：

　　代表性强：金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性菌的代表，大肠杆菌是革兰氏阴性菌的代表，两类细菌对消毒剂的敏感性存在差异，同时检测可全面评估消毒剂的抗菌谱。

　　标准化程度高：这两株菌株是国内外消毒效果评价中最常用的标准菌株，生物学特性稳定，试验重复性好，便于不同实验室间的结果比较。

　　实际意义大：金黄色葡萄球菌和大肠杆菌都是环境中常见的病原微生物，也是医院感染和食源性疾病的重要致病菌，对这两种菌的杀灭效果具有重要的公共卫生意义。

　　标准同时规定，可根据消毒剂特定用途增选其他菌株，体现了标准的灵活性和适用性。

　　2.2载体材料的技术要求

　　标准选用直径24.0mm±0.1mm、厚度1.0mm的光滑不锈钢圆片作为试验载体，技术参数的确定经过了严谨的科学论证：

　　材质选择：不锈钢是硬质无孔表面的典型代表，在医疗、食品加工、公共设施等领域广泛应用，具有很强的代表性。同时不锈钢表面性质稳定，不会与消毒剂发生化学反应，保证试验结果的准确性。

　　尺寸设计：直径24mm的圆片面积适中，既能保证足够的接种面积，又便于操作和洗脱。厚度1.0mm保证了载体的刚性，避免擦拭过程中发生形变。

　　表面要求：表面光洁度对试验结果有显著影响，粗糙表面可能导致消毒剂残留不均或微生物藏匿。标准要求使用光滑不锈钢片，并规定不可使用可能影响试验结果的物品清洁钢片，确保载体表面状态的一致性。

　　三、擦拭循环技术解析

　　3.1擦拭装置的设计原理

　　擦拭装置是模拟机械摩擦的核心工具，其设计直接影响试验的重复性和可比性：

　　压力控制：标准采用装有210.0g±2.0g砝码的离心管作为擦拭压力来源，确保每次擦拭的垂直压力一致。这一重量经过验证，既能模拟实际擦拭的力度，又不会对载体造成损伤。

　　擦拭材料：使用100%聚丙烯无纺布（50g/m²）作为擦拭布，对折四层使用。这种材质和厚度的擦拭布吸水性、耐磨性适中，能较好地模拟日常清洁用抹布的特性。

　　操作规范：擦拭时仅施加水平方向作用力，垂直方向受力全部为离心管与砝码的重量。这一规定避免了人为操作力度差异对试验结果的影响，保证了试验的标准化。

　　3.2干湿交替的擦拭模式

　　标准设计了干擦拭与湿擦拭交替进行的模式，这一设计具有深刻的技术考量：

　　模拟真实场景：在实际使用中，物体表面既会受到干擦（如灰尘擦拭），也会受到湿擦（如清洁消毒）。干湿交替的模式更全面地模拟了各种使用情况。

　　考验消毒剂牢度：湿擦拭对消毒剂的洗脱作用更强，能够更严格地考验消毒剂在表面的附着牢度。只有经过湿擦拭后仍能保持杀菌效果的消毒剂，才真正具有持续消毒能力。

　　擦拭布更换要求：标准规定每次干擦拭或湿擦拭后均需更换擦拭布。这一要求既避免了擦拭布上残留的微生物或消毒剂对后续试验的干扰，也保证了每次擦拭的条件一致。

　　3.3擦拭循环次数的确定

　　标准规定完成两次完整擦拭循环，在第三个循环湿擦拭后进行最终评价。这一循环次数的确定是基于多方面因素的综合考量：

　　时间对应关系：试验模拟的是24小时持续消毒效果，两次完整循环加第三次湿擦拭的设计，与24小时内的典型使用频率相匹配。

　　考核强度适宜：循环次数过少，无法有效区分不同产品的长效性能；次数过多，则可能导致所有产品都失效，失去评价意义。标准确定的循环次数既能有效区分产品优劣，又符合实际使用强度。

　　可操作性强：这一循环次数在保证试验科学性的同时，也考虑了实验室的操作效率，便于标准的推广实施。

　　四、接种体系的技术设计

　　4.1三级接种的梯度设计

　　标准创新性地设计了初始接种、再接种、最终接种三级接种体系，不同接种阶段的菌量不同，形成了合理的梯度：

　　初始接种：菌量为1×10⁸CFU/mL~5×10⁸CFU/mL，接种量较高，模拟消毒剂使用初期表面受到的重度污染。

　　再接种：菌量为1×10⁶CFU/mL~5×10⁶CFU/mL，比初始接种低两个数量级，模拟日常使用中反复出现的轻度污染。

　　最终接种：菌量与初始接种相同，用于评价经过多次擦拭后消毒剂的残留杀菌能力。高浓度的最终接种能够更灵敏地反映消毒剂的残留活性。

　　这种梯度设计既符合实际污染规律，又能有效考核消毒剂的持续消毒性能。

　　4.2有机干扰物的使用

　　标准规定所有接种菌悬液均需与0.6%牛血清白蛋白（BSA）按1:1体积比混合，这一设计的技术意义在于：

　　模拟真实环境：实际环境中，微生物往往与有机物共存，有机物会消耗消毒剂或保护微生物，降低消毒效果。添加牛血清白蛋白能够更真实地模拟这种情况。

　　统一干扰强度：固定浓度的有机干扰物保证了不同试验间干扰条件的一致性，提高了结果的可比性。

　　考验消毒剂性能：在有机物存在的条件下仍能保持良好杀菌效果的消毒剂，实际应用价值更高。

　　五、评价指标与判定标准

　　5.1杀灭对数值的计算

　　标准采用杀灭对数值（KL）作为评价指标，计算公式为：

　　KL=N₀-Nₓ

　　其中N₀为对照组平均活菌浓度的对数值，Nₓ为试验组平均活菌浓度的对数值。

　　杀灭对数值是消毒效果评价的国际通用指标，相比杀菌率，它具有以下优势：

　　灵敏度高：对数值能够更灵敏地反映微生物数量的变化，特别是在杀菌率较高的情况下。

　　统计性好：微生物计数通常呈对数正态分布，对数值更符合统计学要求。

　　可比性强：国际上普遍采用杀灭对数值作为消毒效果评价指标，便于国际间的交流与比较。

　　5.2合格判定的技术依据

　　标准规定，试验重复三次，各次试验杀灭对数值均≥3.00，判定为具有24小时持续消毒作用。这一判定标准的确定基于以下考虑：

　　消毒效果要求：杀灭对数值≥3.00意味着杀灭率达到99.9%以上，这是消毒领域公认的合格线，能够有效控制微生物风险。

　　持续效果验证：经过24小时和多次擦拭后仍能达到3.00的杀灭对数值，说明消毒剂确实具有持续消毒作用，而非仅靠初始的高浓度发挥作用。

　　三次重复要求：要求三次独立试验全部合格，避免了偶然因素的影响，保证了评价结果的可靠性。

　　5.3对照组的质量控制

　　标准对对照组有严格要求，这是保证试验有效性的基础：

　　阴性对照：应无菌生长，证明试验环境、试剂和操作过程无污染。如果阴性对照出现菌生长，说明试验系统存在污染，结果无效。

　　阳性对照：回收菌落数应在1×10⁶CFU/片～5×10⁶CFU/片范围内。这一范围确保了接种菌量适宜，既不会因为菌量过低导致计数误差，也不会因为菌量过高影响消毒剂的杀菌效果评价。